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考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点

    蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲ji橙、考马斯亮蓝、xiu甲fen绿和xiu  jia酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。

    考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，白银亮蓝，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈da光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、bing酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

鉴别试验

（1）本品的水溶液（1+2000），显蓝色。

（2）取本品的水溶液（1+1000）5ml，亮蓝多少钱，加盐酸1ml时，变为暗黄绿色。

（3）本品的硫酸溶液（1+100）显暗橙色，取此液2-3滴加水5ml时，显绿色。

（4）本品的水溶液（1+1000）5ml，加（1+5）5ml，在水浴中加热时变为紫红色。

（5）取本品0.1g，加铵溶液（3+2000）200ml 溶解，取此溶液1ml，加铵溶液（3+2000）配至100ml的溶液，在波长628-632nm处有吸收带。

纯度试验

（1）水不容物 小于0.20%。

（2）氯化物、硫酸盐 以总量计，小于4.0%。

（3）重金属 以Pb计，小于20ug/g。

（4 以As2O3计，小于4.0ug/g。

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天然色素对水基本不溶解，但其配糖体能溶解于水，并与纤维吸附，要求采用后媒染使之固着，如栀子、其染色步骤如下:染色:被染织物在染液中沸染20~30分钟。媒染:在室温条件下进行，依色泽的不同采用不同的媒染剂，媒染剂一般可用含铝、铁、锡等金属离子的化学品。即把煮染过的织物或服饰放在含有媒染剂溶液中浸渍30~40分钟，就完成了媒染过程。水洗:媒染后需要把染色物再投入水中再清洗一下，取出即可。

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