透射电子显微镜透射电子显微镜是一种高分辨率的亚细胞定位方法，它可以通过观察细胞超微结构来确定目标蛋白质的位置。这种方法需要制备样品，但可以提供更直观的细胞结构信息。原子力显微镜原子力显微镜是一种可以在纳米水平上观察细胞表面的亚细胞结构的技术。它可以通过检测样品表面的原子相互作用来形成高分辨率的图像。这种方法不需制备样品，可在自然状态下观察细胞表面结构。

为什么不先对一个基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？

不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。

为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮？

不同物种的细胞可能对基因表达有影响，当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时，可以考虑换一种受体材料。另外，如果是分泌蛋白，在原生质体中无法观察到荧光，此时可以考虑注射叶片来观察荧光。

拍摄时为什么有明场通道？

（1）显示细胞状态，荧光定量，有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的，变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

（2）显示荧光确实是细胞内蛋白表达的，而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。

洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种：

荧光法：利用抗原与的特异性结合，在细胞内产生荧光标记，从而确定细胞内抗原的分布位置。

GFP融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。

亚细胞分离法：通过一定的物理或化学方法，将细胞进行破碎，然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来，再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。

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